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BY4741

文字:[大][中][小] 2017-12-4    瀏覽次數:1663    

            BY4741 Chemically Competent Cell 產品說明書



 

產品規格 (CAT#: YC1060)

BY4741 Competent Cell:                                      100μl/支             保存: -80℃(3個月)

pYES2 (control vector, 10 ng/μl)                               10μl              保存:-80℃(12個月)

Carrier DNA (5 μg/μl)                                              100μl              保存:-20℃(12個月)

PEG/LiAC:                                                                    5ml              保存:    4℃(12個月)


基因型

MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52


產品說明

BY4741菌株來源于釀酒酵母原始菌株——S288C,是實驗室的常用菌株,為配子MATa型,廣泛應用于鈉,鉀離子平衡;細胞抗鹽;各種金屬離子的吸收;重金屬毒性;各種糖類,碳源對真核生物細胞生長的影響;過氧化物,超氧化物的吸收與運輸的研究中。BY4741釀酒酵母為組氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸 、尿嘧啶缺陷型菌株,可直接通過PEG/LiAc將pYES2質粒轉化進入BY4741細胞內。質粒pYES2的篩選標志為URA,可用SD-URA板板進行篩選。唯地生物生產的BY4741感受態細胞經特殊工藝制作,-80℃可保存三個月,pYES2質粒檢測轉化效率>103 cfu/μg DNA。

 

操作方法

1. 取100 μl冰上融化的BY4741感受態細胞,依次加入預冷的目的質粒1-3 μg,Carrier DNA (96℃水浴3 min,快速冰浴

3 min,重復一次) 10 μl,PEG/LiAc 500 μl并吸打幾次混勻,30℃水浴30 min (15 min時翻轉6-8次混勻)。

2. 將感受態移到42℃水浴15 min (7.5 min時翻轉6-8次混勻)。

3. 5000 rpm離心 40 s棄上清,ddH2O 400 μl 重懸,離心 30s棄上清。

4. ddH2O 50 μl重懸,涂板,29℃培養48-96 h。


注意事項

1. 感受態細胞最好在冰上融化。

2. 若使用pYES2質粒表達蛋白,需在培養基中加入2%的半乳糖(篩選培養基中不用加半乳糖;當需要目的蛋白表達時,需加入半乳糖代替葡萄糖作為碳源),以誘導目的基因的表達。

3. 轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

4. 同時轉化2-3種質粒時可增加質粒的用量。

5. 酵母為真核生物,不易長期保存,隨感受態在-80℃保存時間的延長,轉化效率會不斷下降,建議保存時間不超過90天。

6. BY4741酵母菌株對高溫敏感,最適生長溫度為27-30℃;高于31℃,生長速度和轉化效率呈指數下降。

7. 酵母在缺陷培養基中生長速度比YPDA培養基慢,培養基中缺陷成分越多,生長越慢,以轉化涂板為例:涂YPDA平板29℃,48 h培養可見直徑1 mm克隆;涂SD單缺平板29℃,48-60 h培養可見直徑1 mm克隆,涂SD雙缺平板29℃,60-80 h培養可見直徑1 mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培養可見直徑1 mm克隆。


說明書下載

BY4741 Chemically Competent Cell 產品說明書


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